Cromatografía de Capa Fina – TLC

¿Qué es la TLC? – Separación rápida de una amplia gama de sustancias en una sola pasada

Definición: La cromatografía en capa fina (TLC) es una técnica de separación fácil de usar, rápida y muy versátil para el análisis cualitativo y cuantitativo. La cromatografía en capa fina se realiza en una placa de vidrio, plástico o aluminio, que está recubierta con una fina capa de material adsorbente. La muestra se aplica en un extremo de la placa y se permite que un disolvente adecuado suba por la placa mediante fuerzas capilares. Dado que diferentes sustancias suben por la placa de cromatografía en capa fina a diferentes velocidades, se pueden separar, identificar y analizar..

Cromatografía de capa fina: características y ventajas

• Método de separación rápido y muy económico, no requiere instrumentos sofisticados para obtener resultados cualitativos simples

• Preparación de muestras sencilla con placas desechables

• Se pueden analizar varias muestras simultáneamente en condiciones idénticas

• Fácil separación bidimensional utilizando dos fases móviles distintas en diferentes direcciones

Tipos de cromatografía de capa fina

El término cromatografía de capa fina se utiliza generalmente para describir el método en todas sus formas, incluida la operación manual o semiautomática en capas convencionales, de alto rendimiento o modificadas. Las técnicas de cromatografía en capa fina incluyen HPTLC, PLC y TLC-MS, así como varios métodos de detección.

Cromatografía de capa fina: campos de aplicación

La TLC se puede utilizar para analizar prácticamente cualquier clase de sustancias, incluidos pesticidas, esteroides, alcaloides, lípidos, nucleótidos, glucósidos, carbohidratos, ácidos grasos y muchos otros.

Clínica, forense y bioquímica

Determinación de sustancias activas y sus metabolitos en matrices biológicas, diagnóstico de trastornos metabólicos como PKU (fenilcetonuria), cistinuria y enfermedad del jarabe de arce en bebés.

Cosmetología

Materias primas y productos finales para colorantes, conservantes, tensioactivos, ácidos grasos, componentes de perfumes.

Análisis de alimentos

Determinación de pesticidas y fungicidas en agua potable, residuos en verduras, ensaladas y carnes, vitaminas en refrescos y margarinas, aditivos prohibidos, cumplimiento de valores límite.

Análisis ambiental

Análisis de aguas subterráneas, determinación de contaminantes de armamentos abandonados en suelos y aguas superficiales, productos de descomposición de colorantes azoicos utilizados en textiles.

Medicamentos

Identificación, análisis de pureza y determinación de la concentración de principios activos, sustancias auxiliares y conservantes en medicamentos y preparados farmacológicos, control de procesos en procesos de fabricación sintética.

Otras áreas

Tecnología electrolítica (ácido meta-nitrobenzoico en baños de niquelado), pintura mural.

Análisis de los resultados del cromatograma

Un cromatograma terminado proporciona información sobre el comportamiento de migración de las sustancias separadas. También permite calcular el factor de retardo (Rf), que es la relación entre la distancia recorrida por la sustancia y la distancia recorrida por el frente del disolvente. En condiciones idénticas, el valor de Rf es característico de cada compuesto. Por lo tanto, se puede utilizar para confirmar la identidad de un compuesto.

R_f = Z_s / (Z_f – Z₀)

R_f  = factor de retardo

Z_s  = distancia de la zona de sustancia desde la línea de partida [mm]

Z_f  = distancia del frente del disolvente desde el nivel del líquido disolvente [mm]

Z₀= distancia entre el nivel del líquido disolvente y la línea de inicio [mm]

Condiciones previas para la cromatografía de capa fina

¿Cuándo se puede utilizar la cromatografía en capa fina? Se puede utilizar si:

• Las sustancias a analizar son solubles en un disolvente o mezcla de disolventes

• Las sustancias no son volátiles o tienen una volatilidad baja

• Las sustancias son fuertemente polares, de polaridad media, no polares o iónicas

• Se debe analizar un gran número de muestras simultáneamente, de forma rentable y en un período de tiempo limitado

• Todos los componentes de la muestra son detectables individualmente (permanecen al principio o migran con el frente) después de la separación, o se pueden someter a varios métodos de detección (por ejemplo, en el análisis de drogas)

• Las sustancias no se pueden detectar mediante cromatografía líquida (LC) o cromatografía de gases (GC), o solo con gran dificultad

• Las muestras a analizar dañarían las columnas de LC o GC

• Los disolventes utilizados atacarían los sorbentes en las columnas de LC

Recomendaciones de literatura

• Sabine Bladt y Veronika Rickl: Análisis de fármacos vegetales: un atlas de cromatografía de capa fina; mayo de 2009

• Bernard Fried: Cromatografía de capa fina práctica: un enfoque multidisciplinario; mayo de 1996

• Raymond P. W. Scott: Cromatografía de capa fina (serie Chrom-Ed); febrero de 2012